ELISA試劑盒各個(gè)操作步驟的注意要點(diǎn)
在使用前與室溫平衡,再進(jìn)行測定。在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應(yīng),即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后。抗原抗體反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間,這一保溫過程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在ELISA試劑盒中似不恰當(dāng)。
ELISA試劑盒屬固相免疫測定,抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,加入板孔中的標(biāo)本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機(jī)會(huì),只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。
如果對(duì)試劑準(zhǔn)備不太注意,在實(shí)驗(yàn)時(shí)將試劑從冰箱中拿出來即用,而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時(shí)間不夠的問題影響后面的操作。測定中試劑的準(zhǔn)備zui為關(guān)鍵的是,在實(shí)驗(yàn)開始前,將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20min以上后,以使試劑盒
2. 當(dāng)混合蛋白溶液時(shí)應(yīng)盡量輕緩,避免起泡。
3. 洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。
4. 一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
5. 請(qǐng)每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。
6. 如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高,請(qǐng)先稀釋后再測定。
7. 在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液工作液時(shí),請(qǐng)以相應(yīng)的稀釋液配制,ELISA試劑盒不能混淆。
8. 底物請(qǐng)避光保存。
9、控制好每一步的操作時(shí)間。