(一)培養(yǎng)基的制備方法
1.選定培養(yǎng)基配方,制備培養(yǎng)基記錄
首先查閱資料,確定培養(yǎng)基的配方,同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會(huì)有某些差別。因此,除所用的是標(biāo)準(zhǔn)方法,應(yīng)嚴(yán)格按其規(guī)定進(jìn)行配制外,一般均應(yīng)盡量搜集有關(guān)資料,加以比較核對(duì),再依據(jù)自己的使用目的,加以選用,記錄其來源。檢查配制培養(yǎng)基所用的材料、試劑是否齊全,數(shù)量及質(zhì)量(純度、期限)是否合格;同時(shí)還要準(zhǔn)備好配制培養(yǎng)基所用的各種設(shè)備和裝置。微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室需要經(jīng)常配制不同種類的培養(yǎng)基.有必要建立培養(yǎng)基的制備記錄。記錄主要包括培養(yǎng)基名稱、配方、試劑來源及批號(hào)、培養(yǎng)基zui終pH值、滅菌條件、制備的日期、制備者等內(nèi)容,原始記錄保存?zhèn)洳椋€應(yīng)復(fù)制一份記錄隨制好的培養(yǎng)基一同存放.以防發(fā)生混亂。
2.培養(yǎng)基成分的稱取
配置培養(yǎng)基所用的化學(xué)藥品均應(yīng)該是化學(xué)純的,一般可用1/100的天平稱量.根據(jù)培養(yǎng)基的配方計(jì)算出各成分用量.進(jìn)行準(zhǔn)確稱量。培養(yǎng)基的各種成分必須注意防止錯(cuò)亂,一次完成,不要中斷??蓪⑴浞街糜谂詡?cè),每稱完一種成分即在配方處做出記號(hào),并將所需稱取的藥品一次取齊,置于左側(cè),每種稱取完畢后,即移放于右側(cè)。*稱取完畢后,還應(yīng)進(jìn)行一次檢查。稱量好的藥品放人適當(dāng)大小的燒杯中.瓊脂不要加入。蛋白胨極易吸潮,故稱量時(shí)要迅速。加入的一般培養(yǎng)基配方用1000mI。培養(yǎng)基中所含各種成分的質(zhì)量(g)來表示。配制時(shí)應(yīng)先估計(jì)實(shí)際需要培養(yǎng)基的用量.然后按比例計(jì)算各種藥品的用量。
3.加熱溶化培養(yǎng)基
用量簡(jiǎn)取一定量(占總量的1/2~2/3)的蒸餾水,倒人盛有藥品的容器(搪瓷缸、不銹鋼鍋或燒杯)中,不得使用鐵鍋、銅鍋,以防有微量銅或者鐵混入培養(yǎng)基中+使細(xì)菌不能生長。把容器在放有石棉網(wǎng)的電爐上小火加熱.并用玻棒攪拌.以防液體溢出或者焦化。如果發(fā)生焦化現(xiàn)象則需要重新配置培養(yǎng)基。待各種藥品*溶解后,停止加熱,補(bǔ)足水分。如果配方中有淀粉,則先將淀粉用少量冷水調(diào)成糊狀,并在火上加熱攪拌.然后加足水分及其他原料,待*溶化后,補(bǔ)足水分;
溶化瓊脂時(shí)如需制成固體培養(yǎng)基,應(yīng)在已配好的液體培養(yǎng)基呈沸騰狀態(tài)下加入1.5%~2.0%瓊脂條(用剪刀切碎)或瓊脂粉,并用玻棒不斷攪拌,同時(shí)注意控制火力.以免糊底燒焦及防止溢出。繼續(xù)加熱至瓊脂全部溶化.zui后補(bǔ)足因蒸發(fā)而失去的水分?;蛘邔傊瑔为?dú)溶化30min,用一部分水溶化其他成分,然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過程中,因蒸發(fā)而丟失的水分,zui后必須補(bǔ)足。在制備用三角瓶盛固體培養(yǎng)基時(shí),一般也可先將一定量的液體培養(yǎng)基分裝于三角瓶中,然后按1.5%~2.0%的量將瓊脂直接加入各三角瓶中.不必加熱溶化;而是滅菌和加熱溶化同步進(jìn)行.以節(jié)省時(shí)間。
4.調(diào)節(jié)pH值
因培養(yǎng)基在加熱消毒過程中,pH值會(huì)有所改變.培養(yǎng)基各成分充分溶解后,應(yīng)進(jìn)行pH值的初步調(diào)整。例如.牛肉浸液約可降低pH值0.2.而腸浸液pH值卻會(huì)有顯著的升高。因此.對(duì)這個(gè)步驟,操作者應(yīng)隨時(shí)注意探索經(jīng)驗(yàn),掌握培養(yǎng)基的zui終pH值,保證培養(yǎng)基的質(zhì)量。
取適當(dāng)范圍的精密pH值試紙一小條,用玻璃棒蘸取少許待測(cè)培養(yǎng)基滴在試紙上,與比色板對(duì)照顏色,測(cè)定所配培養(yǎng)基的pH值。如培養(yǎng)基偏酸或偏堿時(shí)一可用1mol/LNaOH溶液或1mol/L HCl溶液逐滴緩慢加入,邊加邊攪拌,并隨時(shí)用pH試紙檢測(cè)·直至達(dá)到所需pH值范圍為止。pH值的調(diào)節(jié)通常放在加瓊脂之前,pH值調(diào)整后,還應(yīng)將培養(yǎng)基煮沸數(shù)分鐘,以利于培養(yǎng)基沉淀物的析出.另外調(diào)節(jié)pH值時(shí)應(yīng)注意以下幾點(diǎn)問題:
①培養(yǎng)基必須冷卻至室溫時(shí)才可調(diào)節(jié)pH值。
②加酸或堿溶液時(shí).要緩慢少量加入,并多加攪拌,防止局部過酸或過堿而破壞培養(yǎng)基中營養(yǎng)成分。
③pH值一次調(diào)成功,否則回調(diào)會(huì)影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度。
④配制pH值低的瓊脂培養(yǎng)基時(shí),若預(yù)先調(diào)好pH值并在高壓蒸汽下滅菌.則瓊脂因水解不能凝固。因此.應(yīng)將培養(yǎng)基的成分和瓊脂分開滅菌后再混合,或在中性pH值條件下滅菌.再調(diào)整pH值。
⑤有些微生物要求pH值較.可用酸度計(jì)調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值。